质粒转化-质粒转化到感受态细胞

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于质粒转化的问题，于是小编就整理了3个相关介绍质粒转化的解答，让我们一起看看吧。

把质粒转入细胞的方法步骤是什么啊请教一下？

要看你是什么细胞，是想过表达还是knock down一个基因，稳转还是瞬转。

细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。

方法

脂质体转染法

阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。

电穿孔转染法

电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或儿乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，可以大大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率。

病毒感染

对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染，此法可以快速100%感染，检测成功率高。

常用步骤

1. 转染试剂的准备

① 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。

② 震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。

2. 选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体[1] 体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。

3. 将混合液在室温放置10―15分钟。

4. 吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。

5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。

6. 到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。

如何将一个质粒dna转入到大肠杆菌感受态细胞中？

不对,通过转化到感受态细菌中,不是细胞.感受态的大肠杆菌,可以自己制作也可以通过购买.之后将细菌凃到含有抗生素的板子上,长出克隆后挑取单克隆,将单克隆加入含有抗生素的细菌培养基中培养,之后提取质粒,提取质粒可以购买相应的试剂盒,按照试剂盒的说明书操作即可.质粒是带有抗性基因的,只有含有该质粒的细菌才能在含有对应抗生素的培养基中存活并增殖,这样就能确保是你的表达载体质粒.当然为了防止杂菌的污染,整个过程中最好是无菌操作.而表达载体质粒有可能出现突变等情况,所以可以在提出质粒之后,取少量质粒送测序,来确保序列的无误.

质粒作为克隆载体的条件及性质是什么？

克隆载体是能够通过限制性内切酶,将目的DNA片段整合进去,并且能够转入宿主细胞进行表达的生物DNA。

通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的外源DNA片段,并注意不能破坏载体的自我***性质.将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖.常见的载体有质粒,噬菌粒,酵母人工染色体。

对载体的要求：

①能在宿主细胞中***繁殖,而且最好要有较高的自主***能力.

②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好.

③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的***.这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点.

④容易从宿主细胞中分离纯化出来, 这才便于重组操作.

⑤有容易被识别筛选的标志,当其进入宿主细胞、或携带着外来的核酸序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。

到此，以上就是小编对于质粒转化的问题就介绍到这了，希望介绍关于质粒转化的3点解答对大家有用。