大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于质粒dna的提取的问题,于是小编就整理了3个相关介绍质粒dna的提取的解答,让我们一起看看吧。
如何将质粒dna和细胞染色体dna分开?
染色体DNA呈线性结构,而质粒DNA呈环状结构。因此,将总的DNA提取出来之后,跑电泳的话,由于它们各自的结构不一样,会很容易分开。一般情况下,质粒DNA比线粒体DNA要跑得快一些。
质粒提取时为什么用异丙醇提取dna?
因为异丙醇沉淀的效果要好一些,但最后大多用酒精沉淀,因为酒精容易挥发,对下游的实验影响小。
异丙醇比较疏水,能很更好地沉淀核酸,用乙醇的目的是去盐,它比异丙醇更亲水,所以能去掉一些盐离子。 有时还用70%的乙醇洗样品也是为了增加盐的溶解度。
dna怎么插入载体?
运载体多为质粒,是很稳定且牢固的环状dna。
dna分子就像梯子,梯子的扶手由磷酸二酯键构成,非常牢固,要限制性内切酶才能切开。
切开后质粒会出现两个粘性末端,所以必须用相同的内切酶切下目的基因,这样目的基因和粘性末端才能接合。
基因工程的基本操作步骤主要包括四步:(1)目的基因的获取,即提取目的基因;(2)基因表达载体的构建,即使目的基因与运载体结合;(3)将目的基因导入受体细胞;(4)目的基因的检测与表达,即检测目的基因的表达是否符合特定性状要。
dna插入载体都是用一种方法,限制性内切酶法。
整个过程的原理:
1.从供体中制备高纯度的染色体基因组DNA;
2.用合适的限制酶把DNA切割成若干个片段;
3.将这些片段分别与适当的载体分子进行体外连接;
4.重组载体导入受体细胞中或包装成噬菌体,适宜条件下培养;
5.观察培养基中的重组菌落或噬菌斑,筛选阳性克隆,再将其克隆中的目的基因提取分离出来。
到此,以上就是小编对于质粒dna的提取的问题就介绍到这了,希望介绍关于质粒dna的提取的3点解答对大家有用。
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