pcr试剂-pcr试剂盒

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于pcr试剂的问题，于是小编就整理了3个相关介绍pcr试剂的解答，让我们一起看看吧。

什么是PCR试剂？

PCR试剂简单的理解就是用于做PCR的试剂。实际做PCR的试剂很多，在这儿可以理解为达到PCR级别的试剂。试剂中不应该存在对PCR反应有影响的杂质。象核酸、核酸酶，如果是水的话，盐离子尽可能的小，最好是超纯水。象一些盐类，分析纯的就可以达到要求。如果想做PCR，买点TAQ酶，dNTP就够了，引物找公司合成，模板自己提取。

pcr检测需要哪些试剂？

PCR检测试剂就是PCR的反应体系，经典PCR以DNA为模板，其体系组成以下几方面:1.原始模板:微生物检验中将待测样本中的细菌或病毒DNA，作为扩增反应的原始模板；

2.引物:两段单链寡核苷酸，其序列与代扩增片段的两端分别相同和互补，作为DNA合成反应的引物；

3.原料:4种脱氧核苷酸三磷酸作为DNA合成的原料；

4.DNA聚合酶:催化DNA合成；

5.合适的盐、缓冲液以及温度循环参数。

荧光定量pcr试剂：通常有用sybrgreenmix做的，但是这里建议你用evagreen做，灵敏度和平行性都要好于sybrgreen，并且如果你那是abi或者stratagene的pcr如果用sybrgreen还需要加一步rox很麻烦。

PCR检测是指将微量DNA片段进行大量扩增，以便进行结构和功能分析。PCR即聚合酶链反应，其原理是在体外模拟体内DNA的***过程。

pcr反应体系配制详细操作过程？

1. 试剂准备阶段

试剂准备是 PCR 操作的第一个流程，需要在试剂贮存和准备区的超净工作台或生物安全柜进行，用确保无污染的移液器、枪头及容器等进行分装。所有的 PCR 体系都应该在 - 20℃ 保存，除了 ddH 2 O 之外，其余的试剂组份需完全融化之后再加入，以免影响浓度。配制反应体系应在快速进行，以减少非特异性扩增。体系配制完成之后应马上进行 PCR 反应。

2. 样本制备阶段

样本制备是整个 PCR 反应中最为关键的环节，在接收样本时一定要确保样本的密封性以及样本编号的唯一性。严格遵守操作规程进行加样操作，操作时候尽量少说话或者不说话。

所有操作需要在生物安全柜内进行，操作前后生物安全柜需要进行紫外灯消毒，注意生物安全柜中物品的排放。戴手套并勤于更换，要有「无核酸观念」 。

3. 核酸扩增

在核酸扩增环节需要选择质量好的 Ep 管，装入反应体系的 EP 管上机前混匀、离心，将管壁及管盖上的液体甩至管底部。在样本检测的同时设立对照（阳性对照、阴性对照、阴性模板、试剂对照）。同时严密检测 PCR 扩增仪的各项性能指标，其中对 PCR 扩增仪而言温度控制就意味着质量。

4. 产物分析

常见问题：

1）无 CT 值出现：模板量不足（杂质的引入及反复冻融的情况等）

2）CT 值出现过晚（大于 38）：各种反应成分的降解或加样量的不足

3）标准曲线线性相关性不佳：加样误差、标准品出现降解等

4）阴性对照有信号：模板有基因组的污染

5）扩增效率低：反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解、反应抑制

6）扩增曲线的异常：模板的浓度太高或荧光染料的降解

四、实验室操作环境的维护

1） 各工作区要有一定的隔离，进入工作区域应按照单一的方向进行。试剂贮存和准备区 → 标本制备区 → PCR 扩增区 → 产物分析区单一方向进行。

2） 各个区域实验用品专用：各个区域实验设备和物品应有明确的标记，不能混用。

3） 实验场所要保持通风良好，严格监测各个工作区的温湿度。

4）注意实验室污染的预防。

整个 PCR 实验的操作都需要特别注意避免污染，来自样本的、试剂的以及实验室各种气溶胶，要始终保持「无核酸观念」。

到此，以上就是小编对于pcr试剂的问题就介绍到这了，希望介绍关于pcr试剂的3点解答对大家有用。