细胞分离培养-原代细胞分离培养

大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于细胞分离培养的问题，于是小编就整理了4个相关介绍细胞分离培养的解答，让我们一起看看吧。

细胞分离培养的目的？

目的是为了获得大量细胞供实验所需，如果不进行传代，都用原代的成本会比较高，而且原代细胞分裂次数有限，大约50次，传代可以获得更多细胞。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。

细胞组分的分级分离的意义？

分级分离细胞的原理如下：

细胞内不同结构的比重和大小都不同，在同一离心场内的沉降速度也不同，根据这一原理，用不同转速的离心法，可以将细胞内各种组份分级分离出来。

分级分离细胞的意义如下：

分级分离细胞的过程中，运用自然沉降法、离心沉降法、明胶沉降法、贴附法等，有利于快速分离细胞及细胞内各种组份，从而方便研究细胞以及利用细胞做科研。

分离溶酶体的常用方法？

溶酶体是处理细胞吞噬物的细胞器，含有高浓度的各种水解酶类，用于细胞内的消化过程。它被一层单位膜单独包围，含有12种以上的酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶。

它们都是消化酶，能分解细胞内的物质，如蛋白质、核酸、多糖类。这种消化酶与细胞内含物的其它部分严格的分开，否则它们将进行自身消化，因此又有“***袋”自称。

现在认为溶酶体与卵的受精、形态发生、衰老及某些疾病有关，其分离纯化方法可用分级离心，再用等密度蔗糖梯度离心纯化，也可用Triton-WR1339处理大鼠，2~4h后杀死，毒性低，比重小的Triton-WR1339集中在溶酶体上，使溶酶体比重便轻，易于分离。

操作方法：

所有操作需在4℃下进行。

1． 制备蔗糖梯度溶液：取带有两个连同小杯的梯度混合器，两个小杯分别装入117ml 2.1mol/L蔗糖和13ml 1.1mol/L的蔗糖。

2． 将大鼠处死取出肾脏，以1:8（重量/体积）比例加入0.3mol/L蔗糖，然后在玻璃匀浆器中匀浆肾脏组织。

3． 以150g ×10min离心，弃沉淀，取上清液9,000g×3min离心，弃上清液，取沉淀。

4． 沉淀从上至下依次为白色、黄褐色、暗褐色三种不同颜色层，上层为膜成分的混合物，中层为线立体部分，最底层则为半纯化的溶酶体。先用 吸管 小心吸掉上层，然后沿管壁加入几毫升0.3mol/L蔗糖，慢慢摇管使界面层悬浮起来弃之。用0.3mol/L蔗糖洗涤1次，底层溶酶体部分悬浮在2.5ml 0.3mol/L蔗糖中。

5．将2ml悬浮的半纯化的溶酶体铺在蔗糖梯度上面，用玻璃棒搅动最上层的梯度，使梯度和溶酶体之间的界面破坏，然后100,000g×150min离心，离心结果可见：梯度溶液分3条明显的带和较少的沉淀。最下层的暗黄色到褐色的带即为纯化的溶酶体。

什么叫做质壁分离，为什么只发生在活细胞里？

　　通过质壁分离实验是能够确定细胞的死活的。

　　细胞的质壁分离，就是细胞放在高渗溶液中发生原生质层与细胞壁分离的现象，其原因是细胞在高渗溶液中，由于其内部的渗透压小于外部的渗透压，所以水分会由细胞中向外运动，一段时间后，液泡中的水分就会减少，细胞体积就会变小，由于细胞壁的伸缩性小于原生质层的伸缩性，所以细胞就会发生细胞壁与原生质层分离的现象。

　　细胞的质壁分离现象只能发生在活细胞中。已经死亡的细胞，由于细胞膜失去了选择透过性，所以不会发生质壁分离现象。

　　所以利用细胞的质壁分离实验是能够确定细胞的死活的。

到此，以上就是小编对于细胞分离培养的问题就介绍到这了，希望介绍关于细胞分离培养的4点解答对大家有用。